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Agilent 1100液相色谱仪；DMX 500核磁共振仪；正相 柱：Nucleosil 100 Silica 5  ，250 lnln×4．6 mm；氨基柱：Hypersil APS-1 250 mill× 4．6 mill，5 m；反相柱：Zorbax ODS 150 lnln×4．6 lnln，5， Sephadex LH-20葡聚糖凝胶；硅胶薄层板、薄层层析显色剂、DMF、甲基甘露糖、甲基葡 萄糖、甲基半乳糖、Sepharose；(+)-MNB甲酸及(4-)-MNB甲酸由本实验室方法合成；HPLC所用试剂为国产 HPLC级，其余试剂均为国产分析纯。葡聚三糖、葡聚六糖由。

 

2 实验方法

2．1 寡糖的荧光衍生化反应 取寡糖0．1 mg，按文献[8]报道方法将其还原末端还原成糖醇，减压浓缩至干。生成物溶于0．5 mL干燥的DMSO，加入0．1 mL新配制饱和NaOH水溶液，搅拌20 rain后加入0．2 mL CH I[9】反应2 h，常温减压蒸馏除去 CH3I，LH-20柱分离纯化(柱高 15 cm，内径0．8 cm，移动相为，甲醇，流速为0．5 mL／min)。产物浓缩至干，加甲苯共沸除去水分，加入AcC1 5O0  和12 moVL的HC1 50密闭试管中50~C反应 1 h。反应结束后 ，反应液经 N：吹干后，用 100  乙酸乙脂溶解，平均分成两，管，再次用N：吹干，分别加人含有2 mg(+)及(±)-MNB甲酸的DMF溶液5o  ，60~C反应0．5 h。

2．2 I-IPLC分析 将2．2．I得到的寡糖荧光衍生物用HPLC移动相稀释后，用于 HPLC分析。

2．3 寡糖 ItPLC分析标准单糖(+)-MNB甲酸衍生物的合成

 

3 结果与讨论

色谱条件的选择 为有效分离各种单糖衍生物，本研究比较了硅胶柱、氨基柱和 ODS 3种层析柱的分离效果。在 ODS柱上，各样品保留时间极为接近，分离效果不好。硅胶柱及氨基柱基本能达到分离目的，实验结果 在氨基柱上5种单糖的D一，￡一手性对映体能有效分离，保留时间也相对较短；而在硅胶柱上，虽 然部分单糖样品的分离因子及分离度优于氨基柱，但是4-0．乙酰基．2，3，6．三．0．甲基葡萄糖 D．手性 异构体的甲酸衍生物不能分开，改变移动相配比，温度条件等方法也未能达到分离目的。因此，zui终选择氨基柱。